热结肠道型气分证大鼠模型的构建及肠道黏膜免疫病理评价研究

【摘要】近年来,畜禽养殖业出现了许多发热性疾病,给畜禽养殖业造成了巨大影响。中兽医学认为,发热性疾病均可应用清代医家叶天士创立的卫气营血理论进行辨证论治。其中,热结肠道型气分证是温病发展过程中的重要阶段之一,发病动物临床以发热,肠燥便干,粪结不通,尿短赤,口津干燥,口色深红,舌苔黄厚,脉沉实有力为主要特征。目前尚无成熟的热结肠道型气分证动物造模方法,且对热结肠道型气分证动物的肠道黏膜免疫机能的变化尚无系统研究,给研究发热性疾病的发生机制及中药研发带来了巨大困难。因此,本研究通过对大鼠灌食热性中药及自家粪便,腹腔注射灭活大肠杆菌,建立热结肠道型气分证动物模型；并就对热结肠道型气分证大鼠肠道黏膜组织结构及功能变化,进行病理免疫学评价,确定肠道组织病理结构变化、相关细胞因子信使RNA(MessengerRNA,mRNA)表达情况,以确定热结肠道型气分证大鼠肠道黏膜机能的变化情况。结果表明：1.可按照以下条件成功构建出热结肠道型气分证大鼠模型：给大鼠口服1：1：1的附子、肉桂、干姜的热性中药12d,连续灌服自家粪便后,腹腔注射灭活大肠杆菌液后5h,大鼠可出现热结肠道型气分证动物症状：全身发抖、耸毛、卷缩、精神倦怠、结膜充血、呼吸急促、心率加快、饮水次数增加、尿量减少并发黄、排便时间延长,排便粒数减少、大便干结、并成圆珠状或串珠,耳廓血管充血扩张、体温升高及体重降低等。2.热结肠道型气分证大鼠模型的肠道病理学评价如下：肠道组织石蜡切片、苏木精—伊红染色法(hematoxylin-eosinstaining,H-E染色)结果表明：在第5h时,大鼠十二指肠、空肠及回肠均出现了显著病理损伤,如十二指肠有显著的炎性细胞浸润,且固有层与上皮层出现空泡化,空肠和回肠均出现了黏膜脱落、炎性细胞浸润等病理损伤；同时,即十二指肠、空肠、回肠均出现了显著病理变化,其中以空肠组织损伤最为明显,进一步确定了热结肠道型气分证大鼠肠道组织结构特别空肠受损严重。肠道黏膜上皮内淋巴细胞(intraepitheliallymphocyte,IEL)数量表明：在第5h和7h时,十二指肠IEL数量均显著低于对照组(P<0.05),且第7h时,十二指肠IEL数量显著高于第5h(P<0.05)；在第5h时,空肠IEL数量显著低于对照组(P<0.05),其余组与对照组无显著差异(P>0.05)。肠道黏膜杯状细胞(GobletCell,GC)数量表明：模型组大鼠在十二指肠和空肠肠段GC数量变化趋势基本一致。在第5h和7h时,十二指肠IEL数量均显著低于对照组(P<0.05),且第7h时,十二指肠IEL数量显著高于第5h(P<0.05)；在第5h时,空肠IEL数量显著低于对照组(P<0.05),其余组与对照组无显著差异(P>0.05)。3.检测热结肠道型气分证大鼠肠道组织细胞因子mRNA表达量表明：通过实时荧光定量聚合酶链反应(Real-timePolymeraseChainReaction,Real-timePCR)检测大鼠肠道组织中白细胞介素4(interleukin4,IL-4)、白细胞介素10(interleukin10,IL-10)、转化生长因子β(transformgrowthfactorβ,TGF-p)、肿瘤坏死因子a(tumornecrosisfactora,TNF-a)、干扰素γ(interferon-γ)、免疫球蛋白A(imunoglobulinA,IgA)mRNA表达量,发现除IL-10在回肠和结肠表达量最高外,其余细胞因子均在十二指肠表达最敏感。在气分证状态下,Thl型细胞因子的表达变化为：IFN-y的mRNA表达除结肠外,十二指肠、空肠和回肠IFN-y的mRNA表达均出现增强；TNF-amRNA表达量以5h组十二指肠表达量最低,空肠、结肠组织以5h组TNF-amRNA表达R子的表达变化为:IL-4mRNA表达量在各肠道组织中均降低；IL-10mRNA表达量在5h十二指肠与对照组无显著差异,回肠和空肠、结肠的表达量增强。此外,肠道组织中IgAmRNA表达量以5h组十二指肠、空肠和回肠中升高,结肠组织降低；且以5h组十二指肠和结肠组织TGF-pmRNA表达量增强。空肠、回肠组织以5h组TGF-pmRNA表达量减弱。综上所述,可通过给大鼠灌服12d热性中药和2d自家粪便后,腹腔注射灭活大肠杆菌液后5h,大鼠的各项临床症状符合中兽医热结肠道型气分证证候特征,即成功建立热结肠道型气分证动物模型。热结肠道型气分证状态下,大鼠肠道组织结构受到损伤,以空肠组织受损最为严重；且以十二指肠段组织的细胞因子IL-4、TGF-β、TNF-α、IFN-γ、IgAmRNA表达量最高,IL-10则在空肠和回肠中表达量最高,且肠道组织中细胞的Thl/Th2细胞免疫平衡向Thl细胞免疫方向失衡,组织炎性反应加重,而IgA等表达增加,体现了热结肠道型气分证动物肠道黏膜免疫处于增强状态,但有炎性反应加重趋势的特点。
【作者】贺庭桢；
【导师】王自力；
【作者基本信息】西南大学，小动物外科，2014，硕士
【关键词】热结肠道型气分证；大鼠；动物模型构建；免疫病理评价；

【参考文献】
[1]袁凯杰.复杂性热惊厥患儿动态脑电监测的临床价值[D].青岛大学,康复医学与理疗学,2013,硕士.
[2]陈红.资源型城市经济转型研究——以阜新市为例[D].吉林大学,产业经济学,2004,硕士.
[3]洪冰,刘士明.中厚板轧机辊道受力情况模拟分析探讨[J].一重技术.2007(02)
[4]夏豪杰.高精度二维平面光栅测量系统及关键技术研究[D].合肥工业大学,2006.
[5]车玉章.改进15天以内数值天气预报的方法研究[D].中国气象科学研究院,气象学,2014,硕士.
[6]蒋利.基于J2EE校园网的英语教学系统设计与实现[D].电子科技大学,软件工程（专业学位）,2012,硕士.
[7]肖娟娟.rs4938723、rs7372209与ESCC易感性的研究及SULT1A1 Arg213His多态性与癌症易感性的Meta分析[D].苏州大学,生物化学与分子生物学,2014,硕士.
[8]张柳.基于极大极小搜索算法的亚马逊棋博弈系统的研究[D].东北大学,运筹学与控制论,2010,硕士.
[9]陈冰,韩熠,张承明,孟霞,蒋丽红,缪明明.磁性纳米复合材料的制备及在萃取富集中的应用[J].分析科学学报,2014,01:130-136.
[10]陆燕妮.进出口、贸易政策与经济增长[D].浙江大学,世界经济,2013,硕士.
[11]刘正晔.数字电视节目录放系统研究[D].清华大学,信号与信息处理,2003,硕士.
[12]王彩虹.基于克隆文库法研究不同香型大曲微生物群落结构[D].四川理工学院,发酵工程,2014,硕士.
[13]王力扬.温州市社会治安防控体系建设现状与优化对策研究[D].西南大学,公共管理（专业学位）,2014,硕士.
[14]谭荔丹.对当前经济形势的分析和几点建议[J].财经界(学术版),2014,01:25.
[15]杨硕.房地产开发全过程项目管理研究[D].华中师范大学,工商管理（专业学位）,2013,硕士.
[16]黄晶晶.身份认同视域下的中国后殖民批评研究[D].山东大学,比较文学与世界文学,2013,硕士.
[17]林书雄.以乙酰胆碱酯酶为靶标的虚拟筛选研究[D].华中师范大学,农药学,2013,硕士.
[18]王小苗.循环差族及相关设计[D].北京交通大学,2010.
[19]赵丹.超短脉冲倍频特性研究[D].哈尔滨理工大学,光学工程,2012,硕士.
[20]温瑞.1860-1874年直隶教案研究[D].河北师范大学,中国近现代史,2012,硕士.
[21]肖刚,吴荣兵,周慧龙,倪明江,高翔,岑可法.KOH活化木质素制备高比表面积活性炭特性研究(英文)[J].燃烧科学与技术,2014,01:14-20.
[22]林琳.高压下MgB_2电输运性质及晶体微结构演化研究[D].吉林大学,凝聚态物理,2014,硕士.
[23]曾飞,苗世洪,林湘宁,刘沛.基于序分量的电网广域后备保护算法[J].电力系统自动化,2010,23:57-63.
[24]赵玉兰.独立学院师资队伍的现状调查分析[D].北京中医药大学,社会医学与卫生事业管理,2014,硕士.
[25]杨斌,潘德惠.关于Lurie型控制系统的鲁棒绝对稳定性[J].自动化学报,1998,06:100-103.
[26]王恩乐.铸造铝合金筒形件强旋热塑性变形行为研究[D].南昌航空大学,材料加工工程,2013,硕士.
[27]马璐璐.大跨度输电塔线体系结构抗震分析[D].安徽建筑大学,结构工程,2013,硕士.
[28]杨斌.基于DNA链置换反应的新型核酸适配体荧光探针的构建及应用研究[D].湖南大学,分析化学,2014,博士.
[29]田光辉.移动内容分发网络节点位置部署建模及部署方案研究[D].北京邮电大学,计算机科学与技术,2013,硕士.
[30]谭廷栋.测井解释发现油气层的典型案例[J].石油地球物理勘探,1997,01:16-25+154.
[31]李刚.正渗透膜的制备与应用[D].中国海洋大学,海洋化学工程与技术,2014,博士.
[32]陶晓星.城市轨道交通的BT融资模式研究[D].天津商业大学,工商管理（专业学位）,2013,硕士.
[33]张东英,李伟花,刘燕华,刘冲.风电场有功功率异常运行数据重构方法[J].电力系统自动化,2014,05:14-18+24.
[34]文超.韩城古城民居保护及其利用[D].华侨大学,建筑学（专业学位）,2014,硕士.
[35]赵明玉.美国媒体报道上海世博会的态度分析[D].福建师范大学,英语语言文学,2012,硕士.
[36]高瑜.基于SuperMap GIS的林火管理系统应用研究[D].中南林业科技大学,计算机应用技术,2013,硕士.
[37]张富民.济源大地桩基公司多元化战略选择[D].河南科技大学,工商管理（专业学位）,2012,硕士.
[38]王灿.电视包装中的地域特色文化路径选择[J].艺术科技,2013,12:94.
[39]郑德玲,李燕杰,李育苗.区熔单晶硅生产操作指导专家系统[J].控制与决策,1994,01:64-69.
[40]陈继权.CdZnTe晶体欧姆接触薄膜电极的制备工艺与性能研究[D].西北工业大学,材料学,2004,硕士.
[41]赵木希.阉人歌手与咽音歌唱价值的探索[D].辽宁师范大学,音乐学,2012,硕士.
[42]董莹.超声微泡联合万古霉素对表皮葡萄球菌生物膜的干预作用及机制研究[D].重庆医科大学,儿科学,2014,博士.
[43]胡婧.20世纪20-30年代中国新式音乐社团发展特点研究[D].沈阳师范大学,音乐学,2014,硕士.
[44]程国强.地源热泵换热器的分析与设计[D].浙江大学,2005.
[45]王斌.寿光市农业循环经济发展问题研究[D].西北农林科技大学,农村与区域发展,2012,硕士.
[46]郭红艳.基于叙事法的事件型纪念建筑空间设计研究[D].北京建筑大学,建筑学,2013,硕士.
[47]王虹.实验性2型糖尿病大鼠虹膜中CTGF与虹膜新生血管及虹膜纤维化的相关性研究[D].佳木斯大学,眼科学,2012,硕士.
[48]郭丽婷.民营中小企业政治关联对信贷融资影响的理论与经验研究[D].辽宁大学,经济思想史,2014,博士.
[49]张勇.我国商业银行财务风险防范研究[D].黑龙江大学,会计学,2013,硕士.
[50]朱建康.基于DSP的高压静电喷制微胶囊实验装置控制系统研究[D].武汉纺织大学,机械电子工程,2013,硕士.